故事发生在一个非洲的无名小国中。这个国家地处延绵厄立特里亚(Eritrea),、埃塞俄比亚(Ethiopia)以及肯尼亚(Kenya)三国的活火山带上。游戏开始时当地的居民并没有受到感染，但是随着火山活动的爆发，病毒逐渐传播并将当地的居民变成了类似于丧尸的杀人生物。

　　本作将逐步解开在《生化危机4》里的诸多未解之谜，当然《生化危机5》还很大程度上保持了前作的游戏方式，但也加入了一些新的特色。本作的新特色将让玩家感受到真实的环境，电脑的AI也将有所提高。

　　根据介绍，主角克里斯将会在游戏全程和一位尚未公布具体信息的女性雇佣兵经历严酷的考验。游戏中的女性雇佣兵将可以由AI控制并进行单独行动。但是随时都可以支持第二名玩家加入游戏，操纵这名女性角色行动。游戏还将支持在线的合作模式，有着无缝的2P“跳入/跳出”设计。类似于《生化危机4》中的商人射击的小游戏也将出现在新作中。尽管增加了更强大的火力，但《生化危机5》并不会变成一个纯粹的射击游戏。